輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒

商品詳情：
測(cè)定意義

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取：

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來(lái)水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3.血清等液體：直接檢測(cè)。

計(jì)算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計(jì)算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬(wàn)。

紡錘體蛋白3ELISA試劑盒 SPIN3免費(fèi)代測(cè)試劑

紡錘體蛋白2BELISA試劑盒 SPIN2B免費(fèi)代測(cè)試劑

紡錘體蛋白2ELISA試劑盒 SPIN2免費(fèi)代測(cè)試劑

紡錘體蛋白1ELISA試劑盒 SPIN1免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ136ELISA試劑盒 DEFβ136免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ135ELISA試劑盒 DEFβ135免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ134ELISA試劑盒 DEFβ134免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ133ELISA試劑盒 DEFβ133免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ132ELISA試劑盒 DEFβ132免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ131ELISA試劑盒 DEFβ131免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ130ELISA試劑盒 DEFβ130免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ129ELISA試劑盒 DEFβ129免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ128ELISA試劑盒 DEFβ128免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ127ELISA試劑盒 DEFβ127免費(fèi)代測(cè)試劑

防御suβ126ELISA試劑盒 DEFβ126免費(fèi)代測(cè)試劑
輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒外切-β-1，4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(C1)測(cè)試盒/分光光度法50管/24樣

外切β1，4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(C1)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

微量丙二醛(MDA)測(cè)試盒/TBA法50管/24樣

微量游離血紅蛋白(FHb)測(cè)試盒/比色法50管/48樣

微球菌粉/測(cè)試盒30mg

維生suB1(VB1)熒光檢測(cè)試盒50T

維生suB1測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

維生suB1測(cè)試盒/微量法100T/96S

維生suB2(VB2)熒光檢測(cè)試盒50T
注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果測(cè)定的吸光值過(guò)高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰，因此，570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。