全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
1.首先制備組織單細(xì)胞懸液，制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
2.取一支15ml離心管，加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于
3ml）。
3.用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心20-30min。（注：
根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件，組織單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間
越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果）。
4.離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色單
個(gè)核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一15ml離心管中，向離心管中加
入10ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。
6. 250g，離心10min。
7.棄上清。
8.用吸管以5ml清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。
9. 250g，離心10min。
10.重復(fù)
7、8、9，棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
【注意事項(xiàng)】
1.全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，zui
好在取樣2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品存放時(shí)間越長，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h后
分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離
心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
3.吸取過多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的
粒細(xì)胞數(shù)量增加。
4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí)，分離效果更佳。
5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請上海研謹(jǐn)以尋求幫助。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
封后置常溫保存。如4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1.組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
2.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
3.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
4.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法
A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR技術(shù)
注：上述技術(shù)方案詳情請登陸上海研謹(jǐn)生物科技公司搜索“細(xì)胞分離、
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
出現(xiàn)情況
出現(xiàn)原因
建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層
轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短
適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中
轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長
適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后白環(huán)層彌散
細(xì)胞密度過大
調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見
細(xì)胞密度過小
調(diào)整細(xì)胞密度
2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離
心時(shí)間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，
離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。
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